Analisi qualitativa effettuando una prova della droga

Poiché la maggioranza delle sostanze vietate in sport professionale per prova positiva ha come conseguenza è piuttosto semplice ricevere la conferma della loro presenza a un campione di urina. Siccome molti metodi di schermatura e ottenimento di prove sono basati su applicazione di una chromatography in combinazione con spettroscopia di massa, le raccomandazioni per identificazione di composti chimici per mezzo di sistemi di GH-MS e ZHH-SIG.A sono state sviluppate (/la SIG.A). La presenza di sostanza è considerata confermata se su rappresentazione relativa di una quantità certa di ioni caratteristici (secondo il genere applicato di massa spectrometry) il campione è comparabile, prendendo tolleranze in considerazione, con il campione corrispondente dello standard sottoposto all'analisi simile. Inoltre, il tempo di deduzione di sostanza non deve differire (dentro un intervallo ammissibile di una deviazione) nell'analisi hromatografic di un campione di urina dell'atleta e un campione di controllo dell'urina che contiene la sostanza richiesta. Perciò per la caratteristica e l'identificazione di sostanze in campioni, così difficili per l'analisi, come l'urina fa sondaggi alla ricerca, le informazioni di valore di definizione sul hromatografic e, particolarmente, la massa e i parametri spectrometer dei composti chimici studiati hanno. Le ricerche numerose di massa e le caratteristiche spectrometer dell'incentivazione o il mascheramento di medicine sono finora condotte, e anche i metodi della loro scoperta con lo scopo di realizzazione di una prova della droga sono sviluppati (Masse e al., 1989; de Boer e al., 1991; Donike e al., 1995; Ayotte e al., 1996; Shackleton e al., 1997; Pergolati, 1998; Aguilera e al., 1999; Thevis e al., 2000, 2001, 2002, 2003a).

Più lontano considereremo i principi generali di realizzazione dell'analisi di alcune di queste sostanze.

Steroidi anabolici

Considerando dati statistici riguardo a risultati delle prove droganti fuori portate e classi delle sostanze vietate rivelate, è possibile notare che il più spesso come droga in steroidi di anabolico di sport si rivolgono. Per esempio, più di 40% delle sostanze vietate trovate dai laboratori accreditati dall'IOC nel 2001 fu steroidi anabolici. Uno di rappresentanti di questo gruppo è il testosterone derivato methyltestosterone, ricevuto da sostituzione con gruppo in metallo di un equilibrio restante d'idrogeno a S-17. Gli steroidi anabolici nella maggioranza sono attivamente coinvolti in processi metabolici, formando come risultato una serie di metabolites, per esempio il ricupero di ketogroups, l'ossidazione di gruppi hydroxyl, un hydroxylation, e anche ossidazione/ricupero di carbonio di comunicazioni — il carbonio in un gheriglio di molecola di steroide (Schanzer, 1996). Dopo questa fase I di metabolismo e prima di allocazione siccome una parte di urina là è una fase II di metabolismo, vale a dire la coniugazione di prodotti di una fase I a glyukuropida o solfati.

La strategia comunemente accettata d'identificazione di metabolites di steroidi anabolici è basata su idrolisi enzymatic di metabolites di una fase II durante cui la fase I metabolites, la loro pulizia, la concentrazione, derivatization e l'analisi successiva di GH-MS sono formate. La maggioranza di metabolites di steroidi anabolici, salvo per nandrolon di cui sarà una domanda sotto non è capace per esser formata in un corpo umano nel modo naturale perciò in caso di scoperta di queste connessioni in urina dell'atleta sottoposto a una prova farmaceutica che il messaggio su risultato di prova positivo sarà fatto.

Steroidi progettati

Il problema di uso degli steroidi progettati cosiddetti (lo steroide di designer) in sport e nel mondo scientifico si accumula come una valanga dopo in ottobre 2003 (il Cavaliere, 2003) il laboratorio di una prova della droga di università di California in Los Angeles ha trovato il derivato di sostanza di gestrinon la preparazione medicinale usata per trattamento di un endometriosis. Il riposo di Ethynesilt situato a 17esimo Carboneum di questo legame conduce a formazione di ormone di steroide di tetragidrogestrinon (THG) che può esser considerato come un analogo di uno steroide anabolico molto efficace di trenbolone, comunque le prove cliniche d'influenza fisiologica e gli effetti collaterali di THG non furono mai effettuati. La strategia standard di una prova della droga in laboratori di ricerca che furono ancora mandati su scoperta dei farmaci farmaceutici che passarono prove cliniche sembra vincere evidentemente insufficientemente per vincere l'aspirazione di alcuni atleti una vittoria scese concorrenti con la frode, mettendo la propria salute nello stesso momento a rischio. Considerando il fatto che molte procedure di schermatura sono basate su confronto di campioni standard con saggi di urina con uso di tali tecniche di una massa spectrometry come monitoraggio degli ioni di serie (il monitoraggio d'ione scelto, SIM) o il monitoraggio di reazioni multiple (il monitoraggio di reazione multiplo, MRM), i derivati sconosciuti o le preparazioni medicinali, come THG, sono «invisibili * per procedure standard di controllo. Causa la necessità di sviluppo di tecniche più flessibili di controllo che permetterebbe di scoprire le sostanze sia conosciute, sia sconosciute che possiedono la struttura simile, per esempio il nucleo di steroide generale che in linea di principio è possibile, soprattutto, con uso dei sistemi moderni GH-MS/MS. Può anche piacerLe Testalamin.

Steroidi endogeni

Se in caso di applicazione di steroidi anabolici in urina ci sono metabolites che non sono osservati normali, l'uso di testosterone come droga per trovare molto più difficile siccome questo ormone è prodotto in un corpo umano. I vari approcci, il più molto diffuso di cui sono la determinazione di un rapporto testosterone / epitestosteron (T/E) e massa cosiddetta e misurazione spectrometer di un rapporto di isotopi stabili di carbonio (IRMS), sono stati sviluppati con questo scopo. Il profilo di steroidi endogeni può differire in varie situazioni (Geyer e al., 1996), comunque si ha mostrato che il rapporto Ò/Ý è un indicatore affidabile di uso di testosterone come droga come prodotti di un epitestosterop succede indipendentemente da testosterone. Come soglia il valore di rapporto Ò/Ý 6 uguali sono accettati, comunque in caso di eccesso di una soglia il risultato di prova positivo è registrato non direttamente, l'atleta deve passare la ricerca ulteriore diretta verso controllo del livello di testosterone sollevato naturale.

L'aumento di disponibilità dell'analisi d'isotopo da metodo di massa spectrometry (IRMS) ha promosso la realizzazione di parecchie ricerche che hanno mostrato una possibilità di scoperta di distinzioni tra testosterone endogeno e sintetico per mezzo di questo approccio. Soprattutto, è stato istituito che il testosterone naturale differisce dagli analoghi sintetizzati nel modo chimico che sono usati come provviste mediche basate sul rapporto di isotopi di carbonio, 3C/, 2C. L'applicazione di GH con la combustione successiva della sostanza analizzata e l'analisi del biossido di carbonio formato nello stesso momento permette di ottenere informazioni su origine di testosterone basata sugli isotopi questo su un rapporto |3C e, JC (Homing e al., 1998; Aguilera e al., 1999).

Diuretici e beta2-agonists

Anche i diuretici e β2-àãîíèñòû appartengono a sostanze che l'analisi è di solito fatta per mezzo di GH-MS (/la SIG.A). Soprattutto, il gruppo di diuretici è caratterizzato da una varietà chimica delle medicine nominate con gli scopi simili o identici. Applichi a rappresentanti di questo gruppo di sostanze l'ionizzazione principalmente negativa (Thieme e al., 2001; Thevis e al., 2002, 2003a) che è causato dalle loro proprietà acide, comunque per alcuni diuretici, in triamteren particolare, è richiesto l'ionizzazione positiva. Per β2-àãîíèñòîâ l'approccio principale è la sostanza analizzata con la scoperta successiva di molecola positivamente carica. Com'è descritto in «Metodi di analisi», le fonti di ioni che integrano GH a SIG.A di solito permettono di generare il protonated o le molecole deprotoniron senza la loro frammentazione notevole. Così, le informazioni strutturali sulle sostanze analizzate, specificity e la selettività di analizzatori di massa sono fornite l'applicazione della dissociazione (la CAD) delle medicine ionizzate indotte da collisioni e l'analisi successiva di frammenti derivati. Con questo scopo è necessario avere dati su affinità a protoni e comportamento di prodotti di dissociazione dopo attivazione efficace delle molecole analizzate per mezzo di CAD che considerevolmente differisce su meccanismi di frammentazione di molecole da colpo elettronico (EI). Per diuretici, e anche per maggior parte β2-àãîíèñòîâ, salvo per salbutamol la realizzazione dell'analisi di alta qualità è abbastanza. Di solito i hromatogramma degli ioni estratti fanno la scoperta piuttosto sensibile possibile di queste sostanze in test biologici, e la conclusione positiva sulla loro disponibilità è tirata da una precedenza la base di prevalenza numerica essenziale dei loro ioni risultanti. Nel 2001 il circa 17,5% di casi di risultati positivi effettuati in 25 laboratori di una prova della droga accreditata dall'IOC appartenne ad applicazione β2-agonist, i diuretici furono trovati nel 5% di casi.

Prova della droga: analisi quantitativa

Per alcune sostanze, compreso stimulators, come ephedrine, metabolites di steroidi anabolici, tale, come nandrolon e β2-agonists, come salbutamol, il livello di soglia è istituito, basato su confronto con cui la conclusione su risultati di prova positivi o negativi è tirata. Le varie ragioni sono diventate la base per una tale decisione. Ephedrines sono una parte di molte medicine antifredde perciò antidrogando regole la loro applicazione è legale se il contenuto di derivati di norefedrin, ephedrine e pseudoephedrine in urina non supera 5, 10 o 25 mg-millilitri' 1 rispettivamente. Il gruppo di piaceri di Salbutamol di simpatomimetik, è uno di 4 permessi per uso β2-àãîíèñòîâ (insieme con salmeteroly, terbutaliny e formoteroly) a condizione della loro applicazione nella forma d'inalazione. Per determinare come la medicina è stata applicata (oralno nella forma di targhe o nella forma di un aerosol) e in che il dosaggio, piuttosto difficile, durante le competizioni riferisce su presenza di salbutamol all'atto di prove nella federazione relativa; se il contenuto di sostanza supera 100 ng-millilitri '1. Durante il periodo tra competizioni il livello di soglia di 1 mg-millilitro «1 usando alcun simpatomimetik nelle dosi gli effetti anabolici terapeutici considerevolmente eccessivi sono osservati è istituito. La presenza di un metabolite di nandrolon 5a estrai Za ol 17 odin (norandrosterona) in urina di atleti professionali può esser fino a un certo grado causata da prodotti endogeni perciò per questo contenuto di soglia di sostanza 2 ig-ml*1 per uomini e 5 ng-millilitri' 1 per donne è istituito. Per ragioni per i valori ricevuti le ricerche numerose sono state condotte, i vari fattori che possono influenzare il livello di formazione endogena di questo metabolite, per esempio una pressione fisiologica considerevole o una gravidanza che conducono ad aumento essenziale di contenuto di questa sostanza in urina sono stati anche considerati. La determinazione quantitativa di queste connessioni è compiuta con uso di calibrare curve che costruiscono basato su risultati di determinazione da metodi standard degli standard interni corrispondenti che hanno proprietà fisiche e chimiche simili o identiche (Schanzer, Donike, 1995).

Conclusione

Quando la realizzazione di un farmaco fa sondaggi alla ricerca l'analisi di connessioni basse e molecolari è basata principalmente su applicazione di hromatografic e massa e metodi spectrometer che fanno la scoperta possibile e l'identificazione di farmaci proibiti e il loro metabolites in esami di liquidi biologici, come sangue e urina. Mentre negli anni precedenti l'analisi fu effettuata principalmente da una chromatography del gas con scoperta dei prodotti divisi i vari analizzatori, per esempio ardenti e l'ionizzazione e i rivelatori di fosforo dell'azoto, e anche la massa e gli analizzatori spectrometer. Nei lavori ultimi la chromatography generalmente liquida quali prodotti di separazione dopo ionizzazione con una pressione atmosferica sono esposti la massa spectrometer all'analisi come questo approccio permette di calare considerevolmente il tempo di preparazione di campioni è applicato e non richiede un derivatization delle sostanze analizzate. Inoltre, grazie ad applicazione tripla di analizzatori ed esecuzione di trappole ionica di massa più flessibile ed esperimenti di spectrometer diretti verso determinazione e la caratteristica delle medicine conosciute, e anche le sostanze progettate sconosciute sono diventate possibili che anche promuove il rinforzo di lotta contro droga e uso illegale di farmaci proibiti. A partire dal momento di creazione della lista delle sostanze vietate e i metodi di stimolazione la gamma di sostanze a cui l'attenzione effettuando una prova della droga è fatta cessa cambiare e i laboratori dentro questo processo dinamico devono espandere e modificare costantemente metodi di analisi, aumentando la loro sensibilità, specificity e adattabilità alla soluzione di nuovi compiti di limitare abusi di medicine in sport, e anche salvare atleti da sospetti falsi. E i qui nuovi sviluppi nel campo di una grande velocità e una chromatography molto efficace, una massa e spectrometer, avendo l'alta risoluzione e la sensibilità, e anche le accettazioni moderne d'ionizzazione provvedono a laboratori analitici strumenti preziosi che permettono di ottenere informazioni ancora più dettagliate sulle sostanze applicate, per esempio sulla loro struttura e metabolismo ed espandere strutture di tempo d'identificazione di abusi delle medicine stimolanti. Tante medicine, come steroidi anabolici, sono applicate durante il periodo tra competizioni, ma nello stesso momento tengono l'effetto stimolante durante parecchie settimane, la prova della droga a tutti gli efetti richiede la realizzazione di analisi sia durante le competizioni, sia in di periodo di competizione. Inoltre, il massimo specificity e la sensibilità di procedure analitiche è richiesto.