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Ormone di crescita: prova della droga

05 Dec 2016

La realizzazione di una prova della droga su recombinant somatotropin l'ormone (STG) della persona per molti anni è stata considerata come un compito impraticabile. Comunque recentemente si ha mostrato che almeno due approcci indipendenti permettono di istituire recombinant applicato dell'atleta STG o no. I metodi di analisi sviluppati si sottopongono a prova adesso e sarà possibile sperare di esser applicato come test di doping ufficiale già nel prossimo futuro.

Il problema principale è quello che a differenza di erythropoietin qualsiasi dei metodi offerti non permette di definire STG in urina. È causato prima di tutto da concentrazione estremamente bassa di ormone in urina che non permettono di trovarlo dai metodi esistenti. Inoltre, l'allocazione di somatotropin con urina rappresenta il processo difficile che è caratterizzato da variabilità considerevole e ancora rimane male studiato (Saugy e al., 1996). Il metodo IEF applicato in caso di ERO in esami di urina è inadatto per l'analisi di STG siccome l'ultimo non ha siti web glycosylation. Secondo dati moderni, le molecole STG di un'origine recombinant sono quasi completamente identici alla frazione principale di molecole STG, hypophysis, e non è rivelata qualsiasi differenza fisica e chimica tra loro.

Tuttavia, perfino nonostante la mancanza dei siti web di glycosylation, STG nel sangue il sistema circolatorio è provvisto da mescolanza di isoforms molecolari (Baumann, 1999). La ricerca di queste isoforms avanzò non per quanto in caso di gonadotrophin, comunque per gli anni scorsi diventò possibile identificare alcuni componenti principali. Insieme con l'isoform principale che ha il peso molecolare 22 kd e consiste di 191 equilibrio di rima& di amminoacido in sangue il secondo per rappresentazione quantitativa è trovato, l'isoform più corta con un peso molecolare di 20 kd in quale la successione là non sono nessun amminoacido 32 — 46 (Hashimoto e al., 1998; Tsushima e al., 1999; Leung e al., 2002). Ci sono anche ancora più forme corte STG, comunque vengono alla luce mutabilmente e completamente non sono analizzati già. Alcuni di loro rappresentano prodotti d'idrolisi o la degradazione di molecole STG. Le isoforms STG possono esistere nella forma di monomers, commutatore delle luci e multimer che consiste di identico (gomodimer) o varie isoforms (heterodimeasure).

In molto effetto su casi di STG su un corpo umano media il fattore che ha ricevuto il nome l'insulina come fattore di crescita di me (IFR-1) prodotto principalmente in un fegato, e anche nelle vicinanze in osso cartilaginoso e molti altri tessuti, IFR-1 nel sangue il sistema circolatorio dove contatta le proteine di collegamento specifiche (Le Roith ct al., 2001). Il più gran valore da loro la proteina 3 (IGFBP-3), e anche e subjedinitsa labile (ALS) acido quali prodotti anche sono sotto controllo STG ha IFR. Almeno, per IGFBP-3 si mostra che questa proteina può fare il proprio impatto indipendentemente da collegamento con IFR-1 e perciò può esser considerata come ormone peptide indipendente. Insieme IFR-1, IGFBP-3 e ALS creano un complesso triplo che ha la durata media della vita più grande, nelle molecole che lo creano separatamente. Non dimentichi prendono Hepatamin per migliori risultati.

Una della strategia di ricerca della prova adatta di scoperta di applicazione di STG come uno stimulator è consistita in valutazione di cambiamenti quantitativi di prodotti di effetto dinamico pharm di STG, in aumento possibile particolare di quantità di componenti del complesso triplo che supera la gamma di variabilità naturale a livello (Dali e al., 2000). Uno di vantaggi di una tale prova consisterebbe che il tempo di vita di prodotti di effetto dinamico pharm di STG supera il tempo di vita dell'ormone che permette di aumentare un intervallo durante cui c'è una possibilità di scoperta di abuso di ormone somatotropny. Il consorzio scientifico internazionale ha effettuato una serie a grande scala una ricerca, i prodotti di effetto dinamico pharm di STG diretto verso studio di comando secondo vari fattori, compreso attività fisiche affilate e croniche, età, sesso, un'origine etnica e lesioni (Wallace ct al., t999, 2000; Longobardi ct al., 2000; Ehmborg ct al., 2003). La conferma del fatto d'induzione dei cambiamenti in struttura di effetto dinamico pharm che avviene in caso di applicazione regolare lunga di STG e ha le caratteristiche che permettono di distinguere loro dai cambiamenti indotti da professioni di formazione o altro stimulators è diventata il raggiungimento principale delle ricerche condotte. Soprattutto, il comando di descrizione di modello statistico di parecchi prodotti di effetto dinamico pharm di ormone e considerazione di distinzioni sessuali è stato creato. Anche il fatto che durante determinazione della valutazione di fattori di determinazione dei metodi dell'analisi immune usata con questo scopo è stato fatto e con ciascuno di loro è importante le gamme specifiche di sensibilità sono state istituite. Non tutti i metodi commerciali disponibili rispondono al requisito i requisiti istituiti durante le ricerche che causano la necessità di realizzazione di selezione attenta di sistemi dell'analisi immune che sono supposti esser usati più lontano. Inoltre, siccome il modello statistico molto difficile è la base per questo metodo di prova, è necessario immaginare limiti di variabilità di risultati delle tecniche usate e garantire l'uso fissato in prove di anticorpi identici. Può rappresentare un problema siccome molti tipi di analisi immune sono basati su uso il policlon adesso, ma non gli anticorpi monoclonali. Comunque gli anticorpi di policlon non possono esser ricevuti in un gran numero e dopo la fine di un gruppo è impossibile garantire che il gruppo seguente sarà identico al primo. Tutto questo permette di capire perché le organizzazioni di antidoping internazionali pagano così l'attenzione considerevole a sviluppo di tecnologie di ricevuta di anticorpi monoclonali, adatti per uso. Dopo essersi raffinato di tutti i dettagli metodici, questo metodo di prova può essere molto efficace, ma a confronto con l'analisi del sangue applicata a una prova della droga su ERO.

Ancora uno approccio è diretto verso l'analisi direttamente di STG. In differenza di una gamma di isoforms di ormone, hypophysis, recombinant l'ormone è sempre provvisto dalla forma unica con un peso molecolare di 22 kd. Anche la produzione di una forma di recombinant con un peso molecolare di 20 kg è descritta, ma finora questa proteina è stata usata solo in parecchie prove cliniche. Recombinant somatropin, applicato a trattamento di disavanzo di ormone di crescita a bambini, gli adolescenti e le persone di età matura, ha il peso molecolare 22 kg, è ovvio che le stesse medicine usano che stimulators in sport. Una tal omogeneità o «una mancanza di eterogeneità» a forme di recombinant di ormone che lo distingue da una varietà naturale delle isoforms STG hypophysis, anche fanno una base per cosiddetto «metol dell'analisi immune differenziale» applicata a una prova della droga su recombinant STG (Z. Wu e al., 1999): l'introduzione in un organismo di recombinant monomeric STG con un peso molecolare di 22 kg conduce per aumentare di contenuto relativo di questa isoform in sangue. Questo cambiamento in una gamma di isoforms di ormone diventa ulteriore ancora più notevole in caso di applicazione lunga di STG siccome l'accessione del meccanismo di regolazione di ritorno negativa in questa situazione conduce per diminuire in secrezione di ormone endogeno hypophysis (Wallace e al., 2001a). La schermatura degli anticorpi monoclonali ricevuti usando varie medicine di STG endogeno della persona ha permesso di sviluppare due versioni dell'immunoanalysis. Nella prima opzione gli anticorpi immobilizzati collegano l'isoform di ormone di crescita principalmente di 22 kg, e nel secondo è principalmente somatropin «un'origine hypophysial», provvisto vario, ma alle dimensioni da isoforms (Bidlingmaier e al., 2000). L'analisi di campioni di siero per mezzo di entrambe le versioni dell'analisi immune permette di determinare il contenuto relativo di un'isoform di ormone con un peso molecolare di 22 kg, ma a confronto con gli altri («STG totale») e grazie a esso per rivelare che i campioni con contenuto in modo anormale alto di 22 g di STG.It sono stati confermati che i cambiamenti in una gamma di isoforms di ormone di crescita sono causati solo da applicazione di recombinant STG mentre a stimolazione di secrezione dopo che l'aumento di attività fisico di quantità di tutte le forme di ormone è osservato (Wallace e al., 2001b). Inoltre, la sensibilità di un metodo iniziale è stata considerevolmente aumentata (Bidlingmaicr e al., 2003). L'ego è diventato possibile grazie a ricezione di nuovi anticorpi monoclonali. Insieme con esso il complesso dei test di conferma indipendenti che sono basati anche su applicazione dei nuovi anticorpi monoclonali che hanno l'affinità a epitopa differenziato è stato sviluppato. L'ultimo è una condizione indispensabile dell'accettabilità dell'analisi immune per effettuare una prova della droga: ogni tipo dell'analisi deve esser confermato con altra analisi diretta verso un'alternativa epitop di nasmolecule interessante che permetterà di ottenere i dati supplementari necessari per identificazione di una molecola.

Le caratteristiche di un metodo dell'analisi immune differenziale limitano la sua applicazione solo a conduzione di prove droganti non permette di distinguere la gamma naturale delle isoforms STG e le medicine di ormone estratto da hypophysis della gente morta su struttura. Inoltre, a causa di periodo mezzodi vita estremamente corto di STG nel sangue sistema circolatorio (circa 15 min) la possibilità di scoperta di uso di ormone di crescita come uno stimulator rimane limitata 24 — 36 ore. È ovvio che perfino lo sviluppo di metodi più sensibili non permetterà di vincere questa restrizione siccome si ha mostrato che dopo disintegrazione di proteina recombinant e la fine della risposta negativa di sistema di feedback, il hypophysis inizia di nuovo la gamma solita di isoforms di ormone. D'altra parte, il fatto che per raggiungimento dell'ormone d'influenza stimolante ha bisogno di esser accettato la probabilità di aumenti quotidiana d'identificazione dell'atleta che applica la droga durante le prove impreviste che non sono collegate a partecipazione a competizioni.

L'applicazione di un metodo dell'analisi immune differenziale esige anche la giustificazione incondizionata di competenza dei tipi usati dell'analisi immune. Inoltre, siccome il calcolo di un rapporto è effettuato, è necessario definire precisamente il grado di riproducibilità di risultati di metodi separati e la relazione che prende l'influenza potenziale in considerazione di variabilità di risultati su dimensioni del rapporto contato. La diminuzione essenziale in variabilità di risultati può portare a termine se usare lo stesso piatto titolante micro con gli anticorpi immobilizzati per entrambe le analisi: una metà di un piatto è coperta con anticorpi monoclonali per l'isoform STG con un peso molecolare di 22 kd e altra metà — gli anticorpi monoclonali per ormone totale di altezza umana. Dopo aggiunta di calibrators, kontroly è anche il modello a ogni metà di un piatto, tutto ñå è coperto con gli stessi anticorpi monoclonali scoprenti. Un tal ordine di realizzazione dell'analisi immune permette di ridurre considerevolmente la variabilità che certamente si alzerà all'atto di distribuzione irregolare di materiale di un campione tra due vari piatti (Bidlingmaicr e al., 2000).

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